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叔丁基过氧化氢对 HL7702 细胞生长的抑制作用

点击次数:   更新时间:2018-06-30 08:58     来源:二叔丁基过氧化物关闭
       叔丁基过氧化氢对HL7702细胞生长的抑制作用
       近年来,叔丁基过氧化氢是研究氧化应激引起细胞氧化损伤常用的氧化剂,本文实验结果表明0.05~0.6mmol/L叔丁基过氧化氢能够显著抑制HL7702细胞的存活,并确定适合浓度(IC50)0.15mmol/L叔丁基过氧化氢诱导建立HL7702细胞凋亡模型,见表1。
表1叔丁基过氧化氢抑制HL7702细胞增殖的作用(x珋±s,n=3)
 组别剂量(mmol/L)分光光度值12h24h36h48h空白对照00.48±0.020.62±0.250.89±0.190.98±0.24叔丁基过氧化氢0.050.46±0.030.58±0.230.81±0.200.97±0.28叔丁基过氧化氢0.10.45±0.030.50±0.220.72±0.230.79±0.19叔丁基过氧化氢0.150.48±0.040.33±0.18*0.35±0.16*0.49±0.22*叔丁基过氧化氢0.30.44±0.030.28±0.25*0.26±0.25*0.20±0.20*叔丁基过氧化氢0.60.41±0.020.22±0.20*0.18±0.22*0.13±0.23*与空白对照组比较*P<0.05(下同)
       天麻素抑制叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞死亡本研究选用经典抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸为阳性对照药物,比较N-乙酰半胱氨酸和天麻素抑制叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞凋亡能力[7]。实验结果表明,浓度在20μmol/L的N-乙酰半胱氨酸和不同浓度天麻素分别作用于叔丁基过氧化氢损伤的HL7702细胞12h、24h、36h和48h后,随着药物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐降低,并确定最佳作用时间为24h,最佳药物作用浓度为10μmol/L,见表2。
       天麻素对叔丁基过氧化氢诱导损伤的HL7702细胞形态的影响正常对照组细胞生长状态良好,边界清晰、连接紧密、大小均匀;模型组细胞数量明显减少,形态变圆,边界不清楚,部分悬浮于培养液中;而天麻素(10μmol/L)组细胞数量和形态与模型组比较,得到显著改善,基本接近正常对照组细胞形态。图1天麻素对HL7702细胞形态的影响(200×)
       天麻素对ROS、SOD和MDA含量的影响实验结果显示,天麻素10μmol/L和20μmol/L均能够显著降低叔丁基过氧化氢导致的ROS和MDA含量,同时,上调SOD的活力,见表3。
       天麻素对HL7702细胞线粒体功能的影响实验结果表明,由于叔丁基过氧化氢作用于HL7702细胞,使线粒体发生了氧化损伤,与空白对照组细胞比较,绿色荧光强度显著减弱,表明线粒体功能下降。给予天麻素(10μmol/L)作用24h后可见细胞荧光强度明显增强,表明线粒体功能得到显著改善,见图2。表3各组细胞上清液中活性氧、超氧化物歧化酶和丙二醛水平(x珋±s,n=3)组别剂量(μmol/L)活性氧(吸光度)超氧化物歧化酶(U/ml)丙二醛(nmol/ml)空白对照26.22±0.16*18.62±2.32*1.87±0.23*叔丁基过氧化氢87.38±0.129.14±3.223.78±0.12乙酰半胱氨酸2056.23±0.17*16.07±4.03*2.09±0.15*天麻素577.43±0.2411.55±1.363.14±0.21天麻素1055.98±0.3616.88±2.48*1.96±0.18*天麻素2054.02±0.2516.69±4.45*2.01±0.26*图2天麻素对HL7702细胞线粒体的影响(200×)2.6天麻素对SIRT1和PGC-1α蛋白表达的影响免疫印迹法实验结果显示,与对照组比较,模型组SIRT1和PGC-1α蛋白相对表达量明显降低。

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